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Titank C18 PITC 柱前衍生法檢測中 17 種氨基酸

色譜柱： Titank C18 柱 250 mm× 4.6 mm，5μm ; （貨號：FMG-5560-

E0NU）

柱溫: 35 ℃

檢測波長: 254 nm;

流速: 1.0 mL /min

進樣量: 5μL

流動相: A:乙腈 B:0.1mol/L 醋酸鈉溶液

說明：使用 Titank C18 色譜柱，成功采用 PITC 柱前衍生法分析 17 種氨基酸，相鄰色譜峰分離度均大于 1. 5。 建議可用 Titank C18 3u 250*4.6mm(貨號：FMG-5559-EONU)獲得更大的分離度。

注釋：本應(yīng)用摘自 Journal of Chinese Medicinal Materials DOI:10.13863/j. issn1001-4454.2019.06.025 《 PITC 柱前衍生 HPLC 測定烏梅 17 種氨基酸的含量》

柱前衍生法是一種常用的氨基酸檢測方法，它通過衍生化反應(yīng)將氨基酸轉(zhuǎn)化為更易檢測的化合物，從而提高檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性。在柱前衍生法檢測中，通常會涉及到多種氨基酸的測定，包括但不限于以下17種常見氨基酸：

### 1. 氨基酸種類

* **Asp（天冬氨酸）**

* **Thr（蘇氨酸）**

* **Ser（絲氨酸）**

* **Glu（谷氨酸）**

* **Pro（脯氨酸）**

* **Gly（甘氨酸）**

* **Ala（丙氨酸）**

* **Cys（胱氨酸）**（注意：有時也指半胱氨酸，具體取決于實驗條件和需求）

* **Val（纈氨酸）**

* **Met（蛋氨酸）**（也稱甲硫氨酸）

* **Ile（異亮氨酸）**

* **Leu（亮氨酸）**

* **Tyr（酪氨酸）**

* **Phe（苯丙氨酸）**

* **Lys（賴氨酸）**

* **His（組氨酸）**

* **Arg（精氨酸）**

* **Trp（色氨酸）**（注意：色氨酸在酸水解過程中可能會被破壞，因此在某些檢測方法中可能不包括在內(nèi)）

### 2. 柱前衍生法檢測步驟

柱前衍生法檢測氨基酸的一般步驟包括樣品前處理、衍生化反應(yīng)、高效液相色譜（HPLC）分析等。以下是一個簡化的流程：

#### 樣品前處理

* 將樣品中的蛋白質(zhì)通過酸水解（如鹽酸水解）轉(zhuǎn)化為游離氨基酸。

* 過濾或離心去除雜質(zhì)，得到純凈的游離氨基酸溶液。

#### 衍生化反應(yīng)

* 將游離氨基酸與衍生試劑（如異硫氰酸苯酯、鄰苯二甲醛等）反應(yīng)，生成具有紫外吸收或熒光特性的衍生物。

* 衍生化反應(yīng)通常在室溫下進行，并需要一定的反應(yīng)時間（如1小時）。

#### 高效液相色譜分析

* 將衍生后的樣品注入HPLC系統(tǒng)進行分析。

* 根據(jù)不同氨基酸衍生物在色譜柱上的保留時間和紫外吸收強度進行定性和定量測定。

### 3. 柱前衍生法的優(yōu)點

* **高靈敏度**：通過衍生化反應(yīng)提高了氨基酸的檢測靈敏度。

* **高分辨率**：HPLC技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)多種氨基酸的有效分離。

* **準(zhǔn)確性高**：外標(biāo)法定量準(zhǔn)確可靠。

### 4. 注意事項

* 在進行柱前衍生法檢測時，需要注意控制實驗條件（如溫度、pH值、反應(yīng)時間等），以確保衍生化反應(yīng)的完全性和一致性。

* 色氨酸在酸水解過程中可能會被破壞，因此在使用酸水解法時需要特別注意其穩(wěn)定性。

* 衍生試劑的選擇和用量也會影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏度，需要根據(jù)實驗條件進行優(yōu)化。

綜上所述，柱前衍生法是一種有效且常用的氨基酸檢測方法，能夠準(zhǔn)確測定包括17種常見氨基酸在內(nèi)的多種氨基酸。在實際應(yīng)用中，需要根據(jù)實驗條件和需求選擇合適的衍生試劑和HPLC條件，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。